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本制品用于酵母转化或者文库筛选后菌落PCR鉴定。无需提取质粒等繁琐的操作步骤，菌落经快速裂解液简单处理后即可作为PCR模板使用。本试剂盒提供的酵母专用高保真PCR Mix(1×)，和AD引物混合物，可快速而高效完成PCR扩增，产物可用于测序分析，测序可以用T7，或者插入片段的特异性引物。

• 准备PCR预混液：根据检测克隆数，等比例扩大配制体积。
  
• 吸取5μL酵母快速裂解液加入PCR管中。
  
• 用无菌牙签或10μL枪头刮取少量酵母菌落(直径1～2mm，刮取1/4即可)悬浮在裂解液中。
  
• 吹打或者震荡混匀后，置于98℃ PCR仪裂解5min，即为裂解产物。
  
• 向裂解产物中加入45μL PCR预混液(含引物)，混匀后进行PCR扩增反应。
  PCR反应条件：
  

  温度	事件	循环数
  98℃	3min	1
  98℃	10s	35
  60℃	30s
  72℃	1min(15-30s/kb)
  72℃	5min	1
  4℃	hold	-

  
  
• 取5μL PCR产物进行电泳检测。

• 建议先取3～5个克隆进行预实验后再进行批量实验。
  
• 如预实验失败，将上述第4步得到的裂解产物7000rpm离心1min后取上清加入45μL PCR预混液中，可有效提高PCR效率。
  
• 本制品同样适用于菌液PCR。
  
  • 请将10～20μL菌液离心后的沉淀中，加入10μL酵母快速裂解液；
    
  • 吹打或者震荡混匀后PCR仪98℃裂解5min；
    
  • 7000rpm离心1min后取上清5μL加入45μL PCR预混液中即可。
• 部分样品经过多次PCR都无法检测成功。建议用一步法酵母质粒提取试剂盒(货号：KD3710)提取(约需30min)，再进行PCR扩增。